Aργιρελίνη ένα πεπτίδιο στην μάχη κατά των ρυτίδων

Ένα από τα πιο εμφανή σημάδια της γήρανσης του δέρματος είναι η αυξημένη ρυτίδωση του προσώπου. Αυτό μπορεί να συμβεί φυσικά με την πάροδο του χρόνου και ταυτοποιείται με ορισμένες βιοχημικές, ιστολογικές και φυσιολογικές αλλαγές που έχουν ενισχυθεί με την περιβαλλοντική έκθεση. Υπάρχουν και άλλοι δευτερεύοντες παράγοντες που μπορούν να προκαλέσουν ρυτίδες έκφρασης, αυλάκια και πτυχώσεις στο πρόσωπο. Αυτοί περιλαμβάνουν τη συνεχή έλξη της βαρύτητας, τη συχνή και σταθερή πίεση θέσης του δέρματος του προσώπου (π.χ. κατά τη διάρκεια του ύπνου) ή τις επαναλαμβανόμενες κινήσεις του προσώπου που προκαλούνται από τη συστολή των μυών έκφρασης του προσώπου. Σε κάθε περίπτωση και ανεξάρτητα από την τελική φυσιολογική πορεία παραγωγής, ο μοριακός μηχανισμός που εμπλέκεται στη γηρασμένη όψη σχετίζεται άμεσα με τις αλλαγές στην διαμόρφωση της τριπλής έλικας του κολλαγόνου, την αποικοδόμηση των πολυπεπτιδίων ελαστίνης καθώς και σε κάποια διαταραχή στο περίβλημα της λιπιδικής μήτρας του δέρματος . Έχει αποδειχθεί σαφώς ότι αυτές οι διαμορφωτικές μεταβολές και η διαταραχή του τέλειου λιπιδικού περιβλήματος της μήτρας μπορεί να αποφευχθεί σημαντικά με τη ρύθμιση της σύσπασης των μυών. Οι μύες συνάπτουν συμβάσεις όταν λαμβάνουν νευροδιαβιβαστές που απελευθερώνονται μέσα από μια κύστη. Το σύμπλεγμα SNARE (SNAP υποδοχέα) είναι απαραίτητο για αυτή την απελευθέρωση νευροδιαβιβαστών κατά τη σύναψη (Α Ferrer Montiel et al, The Journal of Biological Chemistry, 1997, 272, 2634-2638). Είναι ένα τριαδικό σύμπλοκο που σχηματίζεται από τις πρωτεΐνες VAMP, Syntaxin και SNAP- 25 (SyNaptosomal Associated Protein). Αυτό το σύμπλεγμα είναι σαν ένα 46 κυτταρικό άγκιστρο το οποίο συλλαμβάνει κυστίδια και τα συνδυάζει με την μεμβράνη για την απελευθέρωση του νευροδιαβιβαστή. Το Argireline είναι ένα μιμητικό του Ν-Terminal end (Ν-τερματικού άκρου) του SNAP-25, που ανταγωνίζεται με το SNAP-25 για μία θέση στο σύμπλοκο SNARE, διαμορφώνοντας έτσι το σχηματισμό του. Εάν το σύμπλοκο SNARE είναι ελαφρώς αποσταθεροποιημένο, το κυστίδιο δεν μπορεί να απελευθερώσει τους νευροδιαβιβαστές αποτελεσματικά και ως εκ τούτου η σύσπαση των μυών εξασθενεί, εμποδίζοντας το σχηματισμό των γραμμών και των ρυτίδων

ΧΡΗΣΕΙΣ ΤΟΥ ARGIRELINE 
 Το Argilreline μειώνει το βάθος των ρυτίδων στο πρόσωπο που προκαλoύνται από τη συστολή των μυών έκφρασης του προσώπου, ειδικά στο μέτωπο και στην περιοχή γύρω από τα μάτια. Είναι ασφαλέστερη, φθηνότερη και πιο ήπια εναλλακτική λύση από την αλλαντική τοξίνη (BOTOX), ενώ τοπικά στοχεύουν στον ίδιο μηχανισμό σχηματισμού των ρυτίδων με έναν πολύ διαφορετικό τρόπο. Παράλληλα, μπορεί να ενσωματωθεί σε καλλυντικές συνθέσεις όπως γαλακτώματα, κρέμες, οροί, κλπ, όπου είναι επιθυμητή η απομάκρυνση των βαθιών γραμμών ή ρυτίδων στο μέτωπο ή γύρω από την περιοχή των ματιών.

ΔΟΚΙΜΗ ΔΙΑΜΟΡΦΩΣΗΣ ΤΟΥ ΣΥΜΠΛΕΓΜΑΤΟΣ SNARE ΜΕ ΤΗΝ ΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΠΕΠΤΙΔΙΟΥ ΤΗΣ ARGIRELINE
Η δοκιμή έδωσε τη δυνατότητα να ακολουθηθεί ο σχηματισμός και η θερμική σταθερότητα του ανασυσταθέντος συμπλέγματος SNARE. Αφού η αργιρελίνη σχηματοποιείται μετά την Ν-τερματική (N-terminal) περιοχή της πρωτεΐνης SNAP- 25, μπορεί να ανταγωνιστεί με αυτή για μια θέση στο σύμπλοκο SNARE. Αυτή η δοκιμή αξιολογεί την ανταγωνιστική αποτελεσματικότητα της αργιρελίνης με την φυσικού τύπου SNAP-25, υπό την ιδιότητά της να συγκεντρώνει τις Syntaxin (Συνταξίνη) και Synaptobrevin (Συναπτοβρεβίνη) που αποτελούν το σύμπλοκο SNARE. Για το σκοπό αυτό, η συγκέντρωση του SNAP-25 περιορίζεται για να επιτρέψει τον αποδοτικό ανταγωνισμό μεταξύ πεπτιδίου και SNAP-25. Μια σημαντική βελτίωση επί της μεθόδου ήταν η χρήση in vitro μεταφρασμένου [35S] - SNAP-25, που έχει αυξήσει αξιοσημείωτα το επίπεδο ευαισθησίας της δοκιμασίας. Η in vitro ανασύσταση και διαμόρφωση του συμπλόκου SNARE περιλαμβάνει την έκφραση και τον καθαρισμό των ανασυνδυαζόμενων πρωτεϊνών της συνταξίνης και συναπτομπρεβίνης, τη μετάφραση του [35S] -SNAP-25 και του συμπλέγματος SNARE με συναρμολόγηση και διαμόρφωση από πεπτίδια. Ισομοριακές ποσότητες της ανασυνδυασμένης συνταξίνης και συναπτομπρεβίνης επωάστηκαν απουσία ή παρουσία της αργιρελίνης στους 4 ° C για 2 ώρες. Στη συνέχεια, 4 μl του [35S] - SNAP-25 προστέθηκαν και το μίγμα επωάστηκε περαιτέρω στους 4 ° C για 12 ώρες. Το σύμπλεγμα SNARE αναλύθηκε με SDS-PAGE σε 12% γέλες, που ακολουθούνταν από φθορογραφική ανίχνευση σε Kodak Χ-ΟΜΑΤ AR φιλμ ακτίνων-Χ. Εξαρτώμενη από τη θερμοκρασία, η αποσυναρμολόγηση του συμπλόκου SNARE χρησιμοποιήθηκε για την ταυτοποίηση ανασυνδυασμένων SNARE. H Αργιρελίνη δοκιμάστηκε σε συγκεντρώσεις mM. Η δοκιμή αυτή αναπτύχθηκε από το Πανεπιστήμιο Miguel Hernandez στην Έλτσε (Ισπανία).

 ΔΙΑΜΟΡΦΩΣΗ ΤΗΣ ΑΠΕΛΕΥΘΕΡΩΣΗΣ ΚΑΤΕΧΟΛΑΜΙΝΩΝ ΣΕ ΧΡΩΜΙΟΦΙΛΑ ΚΥΤΤΑΡΑ ΜΕ ΤΗΝ ΔΡΑΣΗ ΤΟΥ ΠΕΠΤΙΔΙΟΥ ΤΗΣ ARGIRELINE 
Η παρεμπόδιση στην απελευθέρωση κατεχολαμινών προσδιορίστηκε με τον έλεγχο των νευροδιαβιβαστών αδρεναλίνης και νοραδρεναλίνης. Τα χρωμιόφιλα κύτταρα επωάστηκαν με τριτιωμένη νοραδρεναλίνη, αδρεναλίνη και αργιλερίνη. Η απελευθέρωση των κατεχολαμινών, καθώς και η συνολική περιεκτικότητα των κυττάρων, προσδιορίσθηκε με απαρίθμηση υγρού σπινθηρισμού. Η σημαντική διαφοροποίηση των δύο νευροδιαβιβαστών σε συγκεντρώσεις ηΜ αργιλερίνης είναι μια σαφής ένδειξη της ισχυρής αντιρυτιδικής δράσης αυτού του εξαπεπτιδίου. Σημείωση: Οι κατεχολαμίνες δεν εμπλέκονται άμεσα στη σύσπαση των μυών, μια λειτουργία που εκτελείται από τον νευροδιαβιβαστή ακετυλοχολίνη που εκκρίνεται από τα νευρικά κύτταρα. Ωστόσο, τα νευρικά κύτταρα είναι δύσκολα στη χειραγώγηση, ενώ τα χρωμόφιλα κύτταρα, τα οποία εκκρίνουν κατεχολαμίνες, είναι ισοδύναμα από όλες τις απόψεις, και είναι πιο εύκολο να χειραγωγηθούν. Τα κύτταρα χρωμαφίνης χρησιμοποιούνται συχνά ως πρότυπα για τη μελέτη των νευρωνικών ιδιοτήτων και διαδικασιών, για παράδειγμα, της εξωκύττωσης.

 IN VIVO ΔΟΚΙΜΗ ΤΗΣ ΑΝΤΙΡΥΤΙΔΙΚΗΣ ΔΡΑΣΗΣ ΤΟΥ ΠΕΠΤΙΔΙΟΥ ΤΗΣ ARGIRELINE ΣΕ ΥΓΙΕΙΣ ΕΘΕΛΟΝΤΕΣ ΜΕ 10% ΚΑΙ 5% ARGIRELINE
Για την πραγματοποίηση της δοκιμής αυτής, διεξήχθησαν αρχικά αναλύσεις της τοπογραφίας του δέρματος με σκοπό τη μέτρηση της αποτελεσματικότητας ενός γαλακτώματος O/W με περιεκτικότητα αργιρελίνης 10%, με τη λήψη αποτυπωμάτων πυριτίου από την περιοφθαλμική περιοχή από 10 υγιείς γυναίκες εθελόντριες. Αποτυπώματα Πυριτίου (Silicon) ελήφθησαν πριν το τεστ και μετά από 30 ημέρες , με εφαρμογές δύο φορές την ημέρα. Οι αναλύσεις των αποτυπωμάτων διεξήχθησαν με συνεστιακή μικροσκοπία σάρωσης με λέιζερ για την εκτίμηση της εξέλιξης της επιφάνειας του δέρματος πριν και μετά την θεραπεία. Από την άλλη, για την δεύτερη δοκιμή χρησιμοποιήθηκε μια κρέμα με 5% περιεκτικότητα σε αργιλερίνη (0,05%) που εφαρμόστηκε δύο φορές την ημέρα στην περιοφθαλμική περιοχή σε 14 εθελοντές, 39 έως 64 ετών, για 28 ημέρες. Αποτυπώματα πυριτίου των περιοχών εφαρμογής της κρέμας ελήφθησαν πριν από τη δοκιμή και μετά από 28 ημέρες, και η τραχύτητα μετρήθηκε με συνεστιακή προφιλομετρία. Μια μείωση της τάξης του 16,26% σε βάθος των ρυτίδων επιτεύχθηκε, με μέγιστες τιμές έως -31,80%. [29]